Опыты на мышах

1. Пирогенное, аллергенное, мутагенное действие «ЭМ-Курунги»

«ЭМ-Курунга» изучена по некоторым параметрам системы GLP (Good Laboratore Practicae), отвечающей требованиям ГФ. На белых лабораторных мышах была исследована возможная токсичность, пирогенность, мутагенность, тератогенность и другие параметры «ЭМ- Курунги». Предварительно мы оценивали внешний вид подопытных мышей, их живую массу, состояние мочеиспускания, акт дефекации, поведенческие реакции, потребление корма и воды. Установлено, что длительное, в течение 20 дней, введение мышам в желудок через зонд 1-1,5 мл 5%-ной водной эмульсии «ЭМ-Курунги» не изменило у них поведенческих реакций, состояние шерстного покрова и слизистых, они были активными, подвижными, охотно поедали разнообразный корм. Мочеиспускание и акт дефекации у подопытных мышей не отличались от нормы. За период опыта живая масса подопытных мышей увеличилась на 12,1% и составляла 28,80 ± 1,45 г, при норме 23,80 ± 1,49 г.

«ЭМ-Курунга» в острых и хронических опытах не вызывала у мышей повышения температуры тела, а также видимых уродств во втором поколении, т.е. препарат не обладал пирогенным и тератогенным действием. При закапывании 1%-ной водной эмульсии «ЭМ-Курунги» в глаза мышам, втирание ее в эпиллированный участок кожи животных (ежедневно в течение трех дней) не наблюдалось каких-либо аллергических проявлений действия препарата. Оценку мутагенного влияния препарата проводили методом подсчета аномальных головок сперматозоидов. Для этого мышам однократно вводили внутрижелудочно препарат в дозе 1 мл и через три дня оценивали выход максимального числа поврежденных сперматозоидов. Число аномальных головок сперматозоидов у самцов опытной группы составило 1,0-11,2%, а в контрольной группе - 1,4-11,5%, что соответствует уровню, характерному для спонтанного повреждения головок сперматозоидов - 9,4-35,0%. Результаты этих опытов позволяют считать, что «ЭМ-Курунга» не обладает мутагенной активностью.

2. Влияние «ЭМ-Курунги» на организм мышей

В этой серии наблюдений было сформировано две группы животных - контрольная и подопытная. Каждая группа включала по б особей обоих полов, внешне здоровых и активных. Мыши имели гладкий густой шерстный покров, глаза ярко-красного цвета, акты дефекации и мочеиспускания находились в пределах нормы. 2 г сухой закваски «ЭМ-Курунги» делили на 8 равных частей (массой по 0,25 г). Каждую часть препарата смешивали с 1 мл теплой воды (1 = 36-37°С) и вводили мышам подопытной группы внутрижелудочно при помощи микрощприца с полиэтиленовым зондом. Введение препарата осуществляли ежедневно в течение 20 дней. В течение всего времени велись наблюдения за поведением и состоянием животных. Ни одно из животных за время эксперимента не погибло. Подопытные мыши не отличались от животных контрольной группы по внешнему виду, состоянию слизистых оболочек, активности, по потреблению корма и воды, а также по естественным отправлениям. В течение всего срока введения препарата подопытные мыши не проявляли неадекватных поведенческих реакций и ничем не отличались от контрольных. Некоторые отклонения (беспокойство, возбуждение, подергивание отдельных групп мышц, учащенное дыхание) наблюдались в поведении мышей лишь в первые 2 часа после каждой дачи препарата и являлись, по-видимому, следствием стресса, возникающего после введения зонда в желудок животным. По окончании срока введения препарата мышей взвешивали, а после этого декапитировали, кровь и внутренние органы подвергли исследованиям. При аутопсии цвет, размеры, эластичность, а также масса внутренних органов подопытных и контрольных мышей существенно не отличались.

Ряд внутренних органов мышей обеих групп между собой мало отличался. Хотя некоторая тенденция к увеличению массы органов (легкие, селезенка, сердце, почки) отмечалась у животных подопытной группы. Вместе с тем, мы не наблюдали возрастания массы печени, тимуса и надпочечников у мышей, получавших биопрепарат в течение 20 дней.

Установлено, что к концу эксперимента уровень гемоглобина в крови мышей подопытной группы составил 101,00 ± 2,48 г/л, что на 19,77% выше по сравнению с контролем. При этом число эритроцитов увеличилось до 8,26 ± 0,43 х 1012/л, а цветовой показатель возрос на 5,26%. Нужно отметить, что СОЭ контрольных мышей было 1,13 ± 0,089 мм/ч, что несколько выше, чем у подопытных - 0,97 ± 0,053 мм/ч.
Важно отметить расширение границ осмотической резистентности эритроцитов за счет снижения максимальной резистентности до 0,30 ± 0,011% NaС1 и увеличения минимальной резистентности до 0,50 ± 0,014% NaCl. При этом число осмотически устойчивых эритроцитов возросло на 23,33%. Под влиянием препарата «ЭМ-Курунга» в крови подопытных животных увеличилось число лейкоцитов на 15,7% и составило 9,45 ± 0,41х109/л, по сравнению с контролем - 8,17 ± 0,35х109/л. Кроме того, несколько изменилось соотношение отдельных форм лейкоцитов. Результаты биохимических исследований сыворотки крови приведены в табл. 5.

Из табл.5 видно, что под влиянием «ЭМ-Курунги» у мышей подопытной группы возросло содержание в сыворотке крови общего белка на 23,3%, глюкозы - на 12,3%, мочевины - на 9,0%, уровень холестерина снизился на 9,6%. Активность аспартатаминотрансферазы увеличилась на 12,7%, а аланинаминотрансферазы - на 10,2%. Из этих изменений особенно значимым является увеличение в крови содержания общего белка и активности аминотрансфераз (последнее отражает тенденцию к повышению функции печени по переаминированию аминокислот).

Таким образом, сухая закваска «ЭМ-Курунга» не вызывала негативных последствий для организма подопытных мышей. Напротив, прослеживается тенденция к улучшению морфологической картины и биохимического спектра некоторых показателей крови. В результате введения «ЭМ-Курунги» у мышей наблюдалась интенсификация окислительно-восстановительных процессов как следствие увеличения числа эритроцитов и уровня гемоглобина; ослабление скрытых воспалительных процессов, а также некоторое усиление иммунологической устойчивости организма мышей. Мы наблюдали в крови у подопытных животных увеличение общего числа лейкоцитов и нивелирование дисбаланса их в лейкоформуле. Кроме того, отмечено улучшение протекания процессов обмена веществ, а также функционального состояния печени.

Опыты на крысах

Изменение общего состояния крыс, получавших «ЭМ-Курунгу».

В опытах были использованы белые беспородные крысы массой 250- 300 г. Для адаптации крысы в течение семи дней находились в стандартных условиях лаборатории кафедры. Они получали разнообразный корм: зерновую смесь, морковь, капусту, свеклу, молоко и др., а воду ad libitum. Крысы были подвижны и активны, шерсть гладкая, чистая, кожные покровы и слизистые бледно-розового цвета.
После периода адаптации крыс в течение 7 дней поили вместо воды 5%-ной водной эмульсией «ЭМ-Курунги». Никаких отклонений в поведенческих реакциях животных как в течение эксперимента, так и после его завершения установлено не было: поведение крыс не изменилось, акты мочеиспускания и дефекации находились в норме, они активно поедали корм. Живая масса крыс за период опыта выросла в среднем на 4,7%.

При аутопсии крыс установлено, что расположение органов обычное, цвет органов и тканей соответствовал норме, кишечник перистальтировал. Ряд внутренних органов крыс обеих групп между собой не отличался, хотя отмечалась некоторая тенденция к уменьшению массы органов (легкие, селезенка, сердце, почки, надпочечники, тимус) у животных подопытной группы. Вместе с тем, мы наблюдали незначительное возрастание массы печени у крыс, получавших «ЭМ- Курунгу» в течение 20 дней.

3. Инсулиноподобная активность «ЭМ-Курунги»

Из более, чем пятидесяти гормонов млекопитающих и человека лишь инсулин обладает явно выраженным анаболическим действием. Для этого гормона характерно множество механизмов действия. Основным является усиленный транспорт глюкозы через плазматическую мембрану клеток. Молекулярные механизмы такого эффекта инсулина заключаются в том, что он, распластываясь на биомембране, повышает ее проницаемость к глюкозе, способствуя усиленному транспорту. Иными словами, инсулин действует по мембранному механизму и не проникает внутрь клетки. При недостатке инсулина развивается сахарный диабет, для которого характерно повышение порога чувствительности периферических тканей к глюкозе, то есть глюкозы в организме больных достаточно, но она не может утилизироваться в клетках.

Впервые в наших опытах оценивалась эффективность инсулина в организме крыс под влиянием «ЭМ-Курунги».

Установлено, что под действием «ЭМ-Курунги» наблюдается тенденция к более интенсивному включению глюкозы в мышечную ткань лабораторных крыс. Иными словами, препарат «ЭМ-Курунга» обладает инсулиноподобной активностью и способен на молекулярном уровне регулировать транспорт глюкозы в клетках.

Опыты на крупном рогатом скоте

Опыты по изучению влияния биопрепарата «ЭМ-Курунга» на организм коров симментальской породы проводили на базе СХПК «Аграрник» Саратовского района Саратовской области. Животные находились на начальной стадии лактации. Перед началом скармливания «ЭМ-Курунги» у коров брали образцы крови и молока. Эти данные служили контролем. Затем в течение 20-ти дней ежедневно во время вечернего кормления коровам в дополнение к рациону, принятому в хозяйстве, скармливали «ЭМ-Курунгу» по 2 г на голову в смеси с увлажненным зерновым концентратом. В течение всего периода наблюдения подопытные коровы отличались от коров основного стада повышенным аппетитом, лучшим состоянием волосяного покрова, были более активны.

1. Молочная продуктивность

Контрольные дойки проводили в начале и в конце опыта. Препарат своеобразно изменял среднесуточный надой молока.

Из данных табл. 6 следует, что на 20 день среднесуточные надои молока снизились у коров обеих групп, что связано со значительным ухудшением кормления (ноябрь-декабрь) и стельностью. Однако нами, тем не менее, установлено, что у контрольной группы коров среднесуточные надои молока снизились на 39% по сравнению с началом опыта, а у опытной группы - всего на 17,3%. Это свидетельствует о том, что вводимая в рацион «ЭМ-Курунга» способствует удержанию спада среднесуточных надоев молока на 21,7%, а надой молока коров в опытной группе к этому сроку наблюдения превышал данные контроля на 33,3%.

2. Гематологические и биохимические показатели для исследования изменения. гематологических и биохимических показателей на 21-й день эксперимента до начала утреннего доения и раздачи корма, то есть натощак, у коров брали кровь из яремной вены.

Установлено, что скармливание «ЭМ-Курунги» приводит к повышению в крови подопытных коров уровня гемоглобина на 10,1% и увеличению числа эритроцитов на 9,5%. Причем величина цветового показателя указывала на их пропорциональное возрастание в крови подопытных животных.

Полученные данные косвенно свидетельствуют о способности препарата стимулировать окислительно-восстановительные процессы и улучшать снабжение тканей и органов кислородом. Кроме того, нами отмечена тенденция к уменьшению скорости оседания эритроцитов (СОЭ), что указывает на ослабление воспалительных процессов в организме животных. В результате введения «ЭМ-Курунги» в рацион коров, наблюдалось увеличение амплитуды резистентности эритроцитов за счет смещения верхней границы с 0,62 ± 0,017% до 0,70 ± 0,025% N801, а нижней - с 0,46 ± 0,017% до 0,40 ± 0,017% ЫаС1. При этом число осмотически устойчивых эритроцитов возросло на 13,0%, а число молодых форм эритроцитов - на 11,4%. Полученные данные указывают на потенциальную способность сухой закваски «ЭМ-Курунги» стабилизировать биомембраны эритроцитов.

Общее число лейкоцитов после введения «ЭМ-Курунги» в рацион коров возросло на 11,4%. Причем наблюдалась тенденция к колебанию соотношения их отдельных форм. Зафиксированные изменения указывают на устранение диспропорции в лейкоцитарной формуле согласно физиологической норме для крупного рогатого скота и на усиление иммунологической устойчивости подопытных коров.
Результаты биохимических исследований представлены в таблице 7.

Установлено, что после скармливания «ЭМ-Курунги» в крови у коров за 20 дней увеличилась концентрация общего белка на 17,7%, мочевины на 30,1%, содержание глюкозы повысилось на 14,9%, холестерина - на 42,0%. Кроме того, на протяжении всего периода активность трансаминаз (аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы) в крови подопытных животных была выше, чем в контроле. Однако коэффициент де Ритиса свидетельствует, что соотношение этих ферментов находится в пределах нормы. Полученные данные позволяют считать, что у коров симментальской породы под влиянием сухой закваски «ЭМ-Курунги» усиливается обмен веществ, биосинтез белка и улучшается функциональное состояние печени.

Двадцатидневный курс применения «ЭМ-Курунги» способствовал снижению аммиака в периферической крови коров на 14,3%. Содержание глутамина в крови подопытных коров увеличивается на 50%. Это свидетельствует о более интенсивном переносе аммиака в печень и, видимо, дальнейшем метаболизировании его в орнитиновом цикле. Что касается активности аргиназы в крови, то она увеличивается после введения «ЭМ-Курунги» на 50%, отражая повышенное расщепление аргинина на орнитин и мочевину. Подтверждением этому служит повышение в крови уровня орнитина в среднем на 14,2%.

Таким образом, введение в течение 20 дней в рацион сухой закваски «ЭМ-Курунга» оказывает позитивное действие на гематологические и биохимические показатели крови коров симментальской породы.

3. Изменение составных частей молока

Цельное молоко от исследуемых коров оценивали по физико-химическим и биохимическим показателям: плотность, кислотность (активная, титруемая), буферная емкость, содержание общего белка, молочного сахара, сухого вещества, кальция и фосфора. Полученные данные представлены в табл. 8 и табл. 9.
Из табл. 8 видно, что плотность, активная и титруемая кислотность в течение всего эксперимента находились на уровне контрольных значений. В то же время в молоке отмечена тенденция к увеличению буферной емкости на 11,1%, тогда как содержание сухого остатка, напротив, снижалось на 4%.
Полученные данные свидетельствуют о том, что двадцатидневное введение сухой закваски для получения кисломолочного продукта «ЭМ-Курунги» практически не изменило физико-химических показателей молока. 

Что касается макроэлементов - кальция и фосфора, то в молоке наблюдалась тенденция к снижению этих показателей на 7% и 8,3% соответственно. Мы считаем, что применение «ЭМ-Курунги» per os коровам в течение 20 дней существенно не изменяет качественный состав молока.

4. Исследование навоза крупного рогатого скота

У коров симментальской породы до опыта был проанализирован навоз на предмет содержания в нем различных паразитов. Исследование навоза проводили по методу Фюллеборна. Для анализа взята поверхностная пленка, в которой определялось наличие яиц цестод, нематод, ооцистов эймерий и яиц трематод. В контрольных образцах навоза, во всех пробах, обнаружены яйца Neoascaris vitulorm. Другие паразиты не определялись.

Через 20 дней после перорального введения «ЭМ-Курунги» ежедневно по 2 г, навоз этих коров вновь был исследован на яйца, и ооцисты указанных паразитов, в том числе и на яйца Neoascaris vitulorm. Препарат «ЭМ-Курунга» при двадцатидневном введении коровам симментальской породы с кормом не вызывал появления в навозе яиц и ооцист каких-либо новых паразитов, напротив, «ЭМ-Курунга» способствовала исчезновению в навозе яиц Neoascaris vitulorm. Эти исследования проведены профессором кафедры паразитологии и эпизоотологии Саратовского ГАУ Бычковой Л.В. и ассистентом этой же кафедры Свинцовым Р.В.

Литература
Блинов В.А., д.м.н., зав. кафедрой БОБХ, профессор, Буршина С.Н., доцент, Суржина ЕЛ., ассистент, Иванова Н.В., ассистент, Мулинов Р.В., аспирант, Сазонова И.А., зав. лабораторией, Балашова А.Н., инженер, ФГОУ В ПО «Саратовский государственный аграрный университет им. Н.И. Вавилова» (По материалам отчета, 2004 г.)